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点击次数:153 发布时间:2023/7/31 11:34:13
缓冲液、RIPA裂解液(强,无抑制剂)
规格:100ml 500ml
产品名称:RIPA裂解液(强无抑制剂)
保质期:1年
保存条件:-20℃
简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解,并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由 Tris 、NP-40、 sodium deoxycholate 等组成,不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。
组成:
产品名称 | PD001-100ml | PD001-500ml | Storage |
RIPA裂解液(强,无抑制剂)
| 100ml | 500ml | -20℃ |
说明书 | 一份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
操作步骤(仅供参考):
(一)贴壁培养细胞
1、取 Enhanced RIPA lysis buffer 室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液,,低速离心,弃上清。
3、按照 6 孔板每孔加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1~3 内,细胞就会被裂解。
4、离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制
剂。
2、低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~250μl 裂解液的比例,
加 入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。
4、离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、把组织剪切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。
3、按照每20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解。
4、离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项:
1、 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3、 如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。
4、 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex 使样品裂解充分。
5、 溶解 Regal RIPA Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。
6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。
7、 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。
8、本产品仅供科研使用,严禁它用。
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更新时间:2024/4/15 8:36:06
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