土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒(分光光度法

详细内容

　　土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒(分光光度法)

　　中文名称:土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒

　　储存条件:2-8℃

　　单位:盒

　　有效期:6个月

　　英文名称:Soil Peroxidase(S-POD)Activity Assay Kit

　　检测方法:可见分光光度法 Spectrophotometer

　　规格:50T/24S

　　测定意义：S-POD 主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。

　　测定原理：S-POD 催化有机物质氧化成醌，后者在430nm 有特征光吸收。

　　自备用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、yimi100mL(不允许快递)、研钵、冰和蒸馏水。

　　备注：

　　以上数据均来自公开文献,暂未进行独立验证, 仅供参考。

　　产品组成：使用请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

　　试剂名称 规格 保存条件

　　试剂一 粉剂×2 瓶 2-8°C保存

　　试剂二 液体 5 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂三 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂四 液体 100 mL×1 瓶(自备) 2-8°C保存

　　标准品 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　溶液的配制：

　　1、 试剂一：临用加入 10 mL 蒸馏水，用不完的试剂 2-8°C保存一周;

　　2、 试剂四：自备ym;

　　3、 标准品：相当于每 1mL ym相中含有 0.2mg/mL 紫色没食子素。

　　产品说明：

　　S-POD主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。

　　S-POD催化有机物质氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。

　　Soil organic matter Qui (430nm)

　　注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

　　需自备的仪器和用品：

　　可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、0.5mol/L HCl溶液、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、ym(不允许快递)、研钵、冰和蒸馏水。

　　操作步骤：

　　一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

　　新鲜土样自然风干或 37°C烘箱风干，过 30-50 目筛。

　　二、测定步骤

　　1、 标准品处理：将标准品用0.5mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可参考下表。

　　序号 稀释浓度(mg/mL) 标准液体积(μL) 0.5 mol/L HCl 体积(μL) 稀释后浓度(mg/mL)

　　1 0.2 500 500 0.1

　　2 0.2 400 600 0.08

　　S-POD

　　Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

　　Tel: 400-968-6088

　　Fax: 010-56371281

　　3 0.2 300 700 0.06

　　4 0.2 200 800 0.04

　　5 0.2 100 900 0.02

　　6 0.2 50 950 0.01

　　7 - - 1000 0

　　备注：试验中每个标准管需 1000μL 标准溶液。

　　2、 标曲测定：分光光度计预热30min以上，调节波长至430nm，0mg/mL管调零，直接测定稀释后各标准管的吸光度，记为A标准。

　　3、 样本测定：

　　试剂名称 测定管 对照管

　　风干土样(g) 0.05 0.05

　　蒸馏水 - 100

　　试剂一(μL) 400 400

　　试剂二(μL) 100 -

　　震荡混匀，置于30°C水浴锅准确反应1 h

　　试剂三(μL) 200 200

　　试剂四(μL) 1750 1750

　　振荡数次，室温静置30min，用试剂四调零，取1mL上层液于430nm处测定吸光值A，记为A测定管、A对照管。

　　计算ΔA测定=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

　　三、S-POD 活力计算

　　1、标准曲线的建立

　　根据标准管的浓度(y，mg/mL)和吸光度A标准(x，A标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定(x)带入公式计算测定中样本的浓度y值(mg/mL)。

　　2、S-POD活力计算

　　单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

　　S-POD活力(U/g 土样)=y×V提取相÷W÷T=840×y

　　T：反应时间，1h=1/24d;V提取相：提取相总体积，1.75mL;W：样本质量，0.05g。

　　注意事项：

　　每个样本均需做对照管。

　　参考文献：

　　[1] Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. StainTechnology, 1962, 37(6): 367-371.

　　[2] Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescentoxidation of pyrogallol ａnd purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence ａnd chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.

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更新时间：2024/4/25 9:03:46

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