人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa试剂盒实验详情

　　产品规格：48T/96T

　　检测范围：5pg/ml-300pg/ml

　　使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)含量。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa试剂盒实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)水平。用纯化的人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)，再与 HRP 标记的可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)， 通过标准曲线计算样品中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)浓度。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA试剂盒操作步骤：

　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　200pg/ml 5 号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

　　100pg/ml 4 号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

　　50pg/ml 3 号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

　　25pg/ml 2 号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

　　12.5pg/ml 1 号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品*终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

　　4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同 3。

　　8.洗涤：操作同 5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA试剂盒注意事项：

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释定倍数( n 倍)后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

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