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土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 天津本生

点击次数:153  发布时间:2023/2/21 11:09:25

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公司名称:本生(天津)健康科技有限公司 型 号: 生产地址:中国大陆 已获点击:153 简单介绍: 土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 天津本生本生生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。
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  土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 天津本生

  中文名称:土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒

  储存条件2-8℃

  单位盒

  有效期6个月

  英文名称Soil Acid Protease Activity Assay Kit

  检测方法可见分光光度法 Spectrophotometer

  规格50T/24S

  产品组成:使用请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

  试剂名称 规格 保存条件

  试剂一 液体 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂二 粉剂×1 瓶 2-8°C保存

  试剂三 液体 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂四 液体 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂五 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂六 液体 15 mL×1 瓶 2-8°C保存

  标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存

  溶液的配制:

  1、 试剂二:临用加入 10 mL 试剂六,沸水浴搅拌溶解后待用,用不完的试剂 2-8°C保存 1 个月。

  2、 标准品:20μmol/mL 酪氨酸溶液。

  产品说明:

  土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源。土壤酸性蛋白酶在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。酸性条件下,土壤酸性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm有特征吸收峰。

  Casein Tyrosine Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

  注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

  增加样本量进行检测。

  需自备的仪器和用品:

  可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、台式离心机、研钵、蒸馏水、30-50

  目筛。

  操作步骤:

  一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)新鲜土样自然风干或 37°C烘箱风干,过 30~50 目筛。

  二、测定步骤

  Soil acid protease,H+OH-

  1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

  2、 标准溶液的稀释:取10μL 20μmol/mL酪氨酸标准液,加入990μL蒸馏水,充分混匀,配制成0.2μmol/mL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要220μL,为减小实验误差,故配制大体积。)

  3、 样本测定

  试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管

  风干土样(g) 0.1 0.1 - -

  试剂一(μL) 200 200 - -

  试剂二(μL) 100 - -

  充分混匀后,37°C水浴/恒温培养箱中反应24h,期间振荡5-6 次,

  使土样与反应液充分接触。 - -

  试剂三(μL) 200 200 - -

  试剂二(μL) - 100 - -

  混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液待测 - -上清液(μL) 220 220 - -

  0.2μmol/mL标准液(μL) - - 220 -

  蒸馏水(μL) - - - 220

  试剂四(μL) 650 650 650 650

  试剂五(μL) 130 130 130 130

  混匀,40°C水浴或恒温培养箱培养 10min,10000rpm 室温离心 10min,取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA标准=A 标准管-A 空白管。(标准管、空白管只需测 1-2 次,每个测定管需设一个对照管)

  三、土壤酸性蛋白酶活性计算

  单位定义:每天每g土样中产生1μmol的酪氨酸为一个土壤酸性蛋白酶活力单位。

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W

  C标准:标准管浓度,0.2μmol/mL;V反总:反应体系总体积,0.5mL;T:反应时间,1d;W:样本质量,g。

  注意事项:

  当吸光值大于1时,建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。

  实验实例:

  1、 分别称取 2 份 0.1g 土样于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作,使用 1mL 玻璃比色皿 测 定 吸 光 度 , 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.206-0.178=0.028 , ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白 管=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g 土样。

  2、 分别称取 2 份 0.1g 三叶草土样于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作,使用 1mL 玻璃比色皿测定吸光度,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.831-0.612=0.219,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g 土样。

  相关系列产品:

  BC0270/BC0275 土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒

  BC0880/BC0885 土壤碱性蛋白酶(S-ALPT)活性检测试剂盒

  测定意义:土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

  测定原理:酸性条件下,S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm 有特征吸收峰。

  所需仪器及设备:可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

  备注:

  以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。

  土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 本生生物公司供应:荧光定量PCR耗材,细胞培养类,核酸提取耗材,试剂包装类,生物试剂,色素,原料,抗原抗体,试剂盒等,通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。

更新时间:2024/6/4 11:42:10


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