本生资讯——ELISA试剂盒细节要求及样本分析

　　◆根据采用的载体分为：

　　1.疏水性聚脂布作为载体;

　　2.聚苯乙烯微量板为载体;

　　3.硝酸纤维膜为载体。

　　ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因为ELISA试剂盒价格低廉且准确性搞、反应时间短等优点，所以适合大批量的检测，一般常常用于食品安全检测方面。

　　◆ELISA需要遵循的几个细节要点：

　　1、抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性;

　　2、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;

　　3、酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。

　　◆注意事项：

　　1、标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　2、冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上强烈震荡。

　　3、浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

　　4、反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

　　除了以上内容，在ELISA试剂盒细节中，稀释、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样也须摇匀，以试验的均一性。

　　◆ELISA样本分析

　　1.回温平衡：

　　在加样之约半小时左右，把试剂盒从冰箱中取出，放置在室温下进行平衡，平衡到用手握住试剂瓶感觉到不凉为止。如果时间匆忙的话也可以利用手握住试剂瓶进行快速回温。

　　2.反应时间：

　　尽量把时间控制在需要的反应时间，如果时间比较紧迫的话也可以把时间稍微延长几分钟，但不宜太长。显色时间可根据颜色深浅进行调整。

　　3.加样：

　　取出相应数量的微孔板放置在板架上，然后再对板孔进行编号，再对需要稀释的抗体或酶标记物进行稀释。在板孔的六个孔内分别加入标准品1-6，然后在剩下的板孔内加入样品分析液。然后再在每孔内加入其余需要加入的液体。盖上盖板膜以后小幅度振荡，然后放置在相应的环境中进行反应。如是25℃环境反应，则可放置在空调房内进行反应;如果是37℃环境下反应，则必须放置在37℃恒温培养箱里进行反应，如果是4℃环境下反应，则必须放置在2-8度冰箱里进行培养。

　　4.洗板：

　　把板内液体甩干，加入稀释好的洗液250ul/孔，静置10s或稍作振荡后甩掉孔内液体，再次加入洗液，以此重复3-4遍，洗完以后利用吸水纸把孔内液体充分拍干后进行下一步操作，如果孔内有气泡，则利用干净的枪头刺破。

　　5 结束实验:

　　把加样枪全部调到zui大量程,试剂盒放入冰箱,试管及离心管进行清洗,关闭不用的仪器.

　　ELISA试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

原创作者：本生（天津）健康科技有限公司