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小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒

点击次数:154  发布时间:2024/6/20 15:13:21

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公司名称:本生(天津)健康科技有限公司 型 号:BS-2271 生产地址:中国大陆 已获点击:154 简单介绍: 小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒本生生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。
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  小鼠钙结合蛋白(CR)elisa试剂盒实验原理

  小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠钙结合蛋白(CR)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠钙结合蛋白(CR)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  样本处理及要求

  1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

  4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  小鼠钙结合蛋白(CR)elisa试剂盒

  1.酶标仪(450nm)

  2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3.37℃恒温箱

  4.蒸馏水或去离子水

  名称96孔配置48孔配置备注

  微孔酶标板8孔×12条8孔×6条无

  标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无

  样本稀释液6mL3mL无

  检测抗体-HRP10mL5mL无

  20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

  底物A6mL3mL无

  底物B6mL3mL无

  终止液6mL3mL无

  封板膜2张2张无

  说明书1份1份无

  自封袋1个1个无

  备注:

  1、标准品浓度依次为:详见说明书;

  2、经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

  注意事项

  1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

  2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

  3、消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

  4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

  5、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

  6、在储存和温育时避免强光直接照射。

  7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

  8、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

  9、不能使用过期产品。

  10、如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

  试剂准备

  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  操作步骤

  1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  实验结果计算

  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

  试剂盒性能

  1、检测范围:详见产品说明书。

  2、灵敏度:详情见说明书。

  3、特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

  4、重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

更新时间:2024/6/24 8:35:44


标签:小鼠钙结合蛋白(CR)elisa试剂盒   
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