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RIPA裂解液(强,含PMSF)

点击次数:154  发布时间:2024/6/19 14:41:50

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公司名称:本生(天津)健康科技有限公司 型 号:PC012 生产地址:中国大陆 已获点击:154 简单介绍: RIPA裂解液(强,含PMSF)本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。
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RIPA裂解液PMSF

 

PC012                                

RIPA lysate (strong)                                    


简介:

RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WesternIP等。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解,并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液()

伊势久RIPA裂解液(强PMSF)的主要由NP-40deoxycholateSDS组成,含蛋白酶抑制剂。由于含有较高浓度的去垢剂,因此不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

 

组成:

 

产品名称

PC012-100ml

PC012-500ml

RIPA 裂解液(强PMSF

100ml

500ml

使用说明书

一份

 

存储条件:

RIPA裂解液保存于2~8℃12个月有效期。

 

操作步骤(仅供参考)

无需配制,直接使用。

()贴壁培养细胞

1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、 去除贴壁细胞的培养液,低速离心,弃上清。

3、 按照6孔板每孔加入150250 ul含有PMSF的裂解液的比例,加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于细胞13内,细胞就会被裂解。

4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()悬浮培养细胞

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150250 ul裂解液的比例,加入Enhanced RIPA Lysis Buffer

4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

5、 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()组织样本

1、 取Enhanced Lysis Buffer置于室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织,迅速 用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12 min之内,以减少蛋白的降解。

3、 按照每20 mg组织加入150250 ul 裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、 进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事项:

1、 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

3、 如果细胞量较多,必需分装成50100万细胞/离心管,然后再裂解。

4、 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。

5、 溶解伊势久RIPA Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。

6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。

7、 细胞裂解的操作步骤,应在低温环境下进行。

 


 

更新时间:2024/7/11 8:39:44


标签:RIPA裂解液   
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