本生阐述影响ELISA试剂盒灵敏度出现问题及解决办法

　　ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。BUNSEN本生技术小编详解：将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结一下，以期给同行带来—些启发，提高试验质量。

　　1、超过有效期。试剂盒必须在有效期内使用，超过有效期的产品可能会产生很弱的信号。

　　2、试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响。

　　3、试剂、样品用未平衡至室温

　　4、加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁。

　　5、洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力，

　　6、孵育时间及孵育温度未达到要求，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。

　　7、洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求，洗涤冲击力太大，浸泡时间太长等，

　　8、显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入。

　　9、底物作用时间不够，

　　10、燕馏水水质有问题

　　ELISA试剂盒灵敏度出现问题相应的解决方法：

　　1、实验检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期,

　　2、不要将试剂盒长时间置于常温下，按便用规定储藏。

　　3、试剂、样品用平衡至室温

　　4、确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。校正移液器，移液器与吸晚配合要紧密吻合。移液不宣太快，尽量排放完。

　　5、确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如爱氮钠等，确认配制洗液的容器已洗千净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。

　　6、孵育温度应控制在37-38C，孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门，以免影响保温。

　　7、严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数，

　　8、显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂A，后加显色剂B，不可将A、B液混合。

　　9、准确定时。

　　10、测定燕馏水配制试剂对酶免疫法的影响。

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