影响ELISA试剂盒测定成果的原因及解决办法
 

　　ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简略等优点，但是在详细实验过程中影响要素较多，而且要按照严厉的阐明要求，在临床检验中除正常反响外，有时常可见到一些错误成果(即假阳性或假阴性成果)。

　　影响ELISA测定错误成果的原因主要有：

　　①标本要素;

　　②试剂要素;

　　③操作要素。

　　一、类风湿因子

　　人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合，然后导致假阳性。

　　解决办法:

　　1.用F(ab)2替代完好的IgG;

　　2.标本用联有热变性(63℃，10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用);

　　3.检测抗原时，能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。

　　二、补体

　　ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中，抗体分子发作变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 能够将二者连接起来，然后形成假阳性。

　　解决办法:

　　1.用EDTA稀释标本;

　　2.用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。

　　三、嗜异性抗体

　　人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s)结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能形成假阳性。

　　解决办法:

　　可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s)，但加入量不足或亚类不同时无效。

　　四、嗜靶抗原的本身抗体

　　抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。

　　解决办法:

　　测定需用理化方法将其解离后再测定。

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