本周热点 ELISA实验操作失败的主要原因
 

　　ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性)，那么致使实验不成功的主要原因有哪些咧?下面我们一起来看看本生技术小编为大家推荐，本周焦点：ELISA实验操作失败的主要原因。

　　一、标本受细菌污染：因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

　　第二，标本的影响：溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)，在洗涤过程中往往难以*洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

　　第三，标本凝固不全：在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

　　第四，标本保存不当：在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性;为克服上述干扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

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